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        eNOS-3,BIM大鼠內皮型NO合酶3elisa試劑盒說明書

        eNOS-3,BIM大鼠內皮型NO合酶3elisa試劑盒說明書

        簡要描述:eNOS-3,BIM大鼠內皮型NO合酶3elisa試劑盒說明書用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中大鼠內皮型NO合酶3(eNOS-3)的含量。

        產品型號:

        所屬分類:大鼠ELISA檢測試劑盒

        更新時間:2020-12-29

        廠商性質:經銷商

        詳情介紹

        本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中大鼠內皮型NO合酶3eNOS-3)的含量。

        有效期:6個月

        保存條件:2-8℃

        本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷

        實驗原理

        試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被大鼠內皮型NO合酶3(eNOS-3)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠內皮型NO合酶3(eNOS-3)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

         

        eNOS-3,BIM大鼠內皮型NO合酶3elisa試劑盒說明書保存條件及有效期

        1.試劑盒保存:2-8℃。

        2.有效期:6個月

        運輸條件:低溫運輸,用干冰或者冰袋低溫運輸。

        eNOS-3,BIM大鼠內皮型NO合酶3elisa試劑盒說明書樣品采集:

        收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。

        操作步驟

        ELISA試驗時,注意事項如下:

          1.正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

          2.在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

          (1)固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。

          (2)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。

          (3)酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

          (4)酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。



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