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        腫瘤壞死因子的檢測

        發布時間: 2021-12-15  點擊次數: 133次
          一、 生物學檢測法
         
          TNF的主要 生物 學活性之一就是對某些腫瘤細胞的細胞毒作用。根據這一特點,可利用TNF敏感的靶細胞測定TNF活性,根據細胞死亡得出TNF的相對活性。該法的關鍵是選擇敏感特異的靶細胞。靶細胞可以是長期傳代培養的細胞系,也可以是新鮮分離的原代細胞(如瘤細胞)?,F以貼壁生長的L929細胞為例,簡述TNF活性的檢測原則。
         
          兩種TNF均可傷體外培養的L929細胞,細胞死亡率與TNF活性成正比。某些染料如中性紅、結晶紫等能使活細胞染上相應顏色,再用脫色液將染料脫出,通過測定其吸光度值間接監沒細胞存活狀態。
         
          試驗原則是收集對數生長期的L929細胞,用培養液調細胞至適當濃度,加入培養板小孔中,置37℃,5%CO2 溫箱中培養16~24h,換液后,在各孔中加入不同稀釋度的待檢樣品,再加適當濃度的放線菌素D和適量培養液,繼續溫育16~24h,棄培養液,經Hanks液洗滌后,每孔加入適當濃度的結晶紫染色液,37℃培養1h,使活細胞充分著色。
         
          然后各孔加1%SDS短時溫育使染色細胞溶解,再以酶標測定儀測各孔A 570nm 值。每次檢測均設培養液(陰性)對照和不同濃度的rTNF(陰性)對照。以使陰性對照50%細胞溶解的標本最大稀釋倍數為TNF活性單位,以u/ml表示。
         
          由于放線菌素D能抑制DNA的合成、降低靶細胞對損傷的修復機制,因而在檢測中加入放線素D可使靶細胞對TNF的敏感性增高10~200倍。
         
          二、免疫學檢測法
         
          通常采用ELISA,該法特異性高、敏感性強且快速使捷,而且能夠區別TNFα和TNFβ,為臨床檢測病人 血清 中TNF水平的有效方法,但不能反映TNF活性。
         
          
         
          三、其它檢測法
         
          檢測TNF還可用生物發光法及NAG微量酶反應比色法。這類方法是應用生化技術檢測細胞內代謝的變化,從而推知靶細胞功能變化及死亡情況。其優點是不僅反映細胞的死亡情況,而且能反映細胞的功能變化。此外,還具有快速、方便、微量的特點。
         
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